透射電鏡

透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope ,簡稱TEM），可以看到光學顯微鏡下無法看清的小于0.2um的細微結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)稱為亞顯微結(jié)構(gòu)或超微結(jié)構(gòu)。要想看清這些結(jié)構(gòu)，就必須選擇波長更短的光源，以提高顯微鏡的分辨率。1932年Ruska發(fā)明了以電子束為光源的透射電子顯微鏡，電子束的波長要比可見光和紫外光短得多，并且電子束的波長與發(fā)射電子束的電壓平方根成反比，也就是說電壓越高波長越短。目前TEM的分辨力可達0.2nm。

掃描電鏡（SEM）和透射電鏡（TEM）的區(qū)別：

高分辨的透射電子顯微鏡常用于觀察普通顯微鏡不能分辨的細致物質(zhì)結(jié)構(gòu)，掃描電子顯微鏡主要用于觀察固體表面的形鏡。有時，將兩者有機結(jié)合可以得到比較全面的材料分析結(jié)果。下面將從多方面比較，細致掃描電鏡和透射電鏡的區(qū)別。

透射電鏡

晶體結(jié)構(gòu)可以通過高分辨率透射電子顯微鏡來研究，這種技術也被稱為相襯顯微技術。當使用場發(fā)射電子源的時候，觀測圖像通過由電子與樣品相互作用導致的電子波相位的差別重構(gòu)得出，然而由于圖像還依賴于射在屏幕上的電子的數(shù)量，對相襯圖像的識別更加復雜。

非晶樣品透射電子顯微圖像襯度是由于樣品不同微區(qū)間存在的原子序數(shù)或厚度的差異而形成得到，即質(zhì)量厚度襯度，也叫質(zhì)厚襯度。質(zhì)厚襯度適用于對復型膜試樣電子圖象作出解釋。質(zhì)量厚度數(shù)值較大的，對電子的吸收散射作用強，使電子散射到光欄以外的要多，對應較安的襯度。質(zhì)量厚度數(shù)值小的，對應較亮的襯度。

1.腦組織取材及應用

腦組織取材法：在一般情況下，腦組織先進行灌注固定（4%多聚甲醛溶液），待固定完成后應馬上打開顱骨，暴露出所要取材的位置，根據(jù)取材的要求以及實驗目的割取相應的部位，如研究腦神經(jīng)軸索、髓鞘以及神經(jīng)膠質(zhì)細胞，建議取材于腦組織白質(zhì)部分，此處有髓神經(jīng)纖維相對較多，膠質(zhì)細胞比較非富；如要研究神經(jīng)元以及血腦屏障結(jié)構(gòu)，建議取材于腦皮質(zhì)的灰質(zhì)部分，而且最好做定向包埋，以神經(jīng)元長軸方向（大約為腦組織的矢狀面）作為切面方向，這樣可以很好的觀察神經(jīng)元細胞核、軸突以及樹突結(jié)構(gòu)的變化，突觸以及毛細血管的結(jié)構(gòu)也比較容易見到。

圖：暴露于AgNP的動物腦組織的代表性TEM顯微照片RER（箭頭）和擴大的高爾基體復合體（G）的腫脹碎片。

圖：自噬抑制劑對腦組織的亞細胞結(jié)構(gòu)具有保護作用。采用透射電子顯微京（TEM）觀察小鼠腦組織亞腦細胞結(jié)構(gòu)的病理變化。在JEV+Rapa和JEV組觀察到腦組織線粒體嚴重損傷，在JEV+Wort和JEV+CQ組觀察到腦組織線粒體輕微損傷（紅色箭頭，線粒體；比例尺，2um）

2.睪丸及附睪組織取材及應用

睪丸及附睪組織取材方法：由于睪丸組織比較松散，固定難度較大，目前大多采取灌注固定法進行固定，但此方法如果處理不當，很可能會造成固定不良，原因是睪丸的血供離心臟比較遠，固定液難以到達，睪丸曲細精管基膜比較厚，固定液難以滲透，導致固定不良。我們還可以采用注射固定法即用注射針直接插入睪丸內(nèi)部，從多個方向進行注射固定液，然后割取觀察部位進行進一步浸泡固定；另一種方法就是直接割取觀察部位進行浸泡固定的，需要注意的是，取材的睪丸組織必須切的很細，讓固定液直接滲透入曲精細管的斷面，這樣，各層生殖細胞都會得到很好的固定，不過比較麻煩的就是每次操作的都要離心處理。另外需要注意的是，要觀察生精細胞，必須取材于睪丸的睪丸網(wǎng)部位，如果取材于直精小管部位，就看不到生精細胞了，大鼠與小鼠睪丸網(wǎng)比較表淺，就在白膜下附近。如果要觀察成熟精子，最好取材于附睪的尾部，此處精子已基本成熟，而且精子密度最高。

圖：附睪Prm1缺陷精子染色質(zhì)濃縮和ROS誘導的DNA損傷分析。（A）Prm1+/+、和Prm1-/-附睪精子的代表性透射電子顯微照片。（B）來自Prm1+/+、Prm1+/-和Prm1-/-雄性（n=3）的附睪精子DNA濃縮的定量；對每名男子100個精子進行了分析。（C）Prm1-/-附睪精子的透射電子顯微照片。（D）載有從Prm1+/-、Prm1-/-、Prm2+/-、Prm2-/-和通過電泳分離的WT雄性附睪精子分離的基因組DNA的瓊脂糖凝膠。載有梯子（L）的其他車道已從圖像中剪下。（E）8-OHdG陽性精子在Prm1+/+、+Prm1+/-、Prm1-/-，小鼠（n=3）的附睪頭和尾部組織切片上的百分比。（F）來自Prm1+/+、Prm1+/-、Prm1-/-雄性的睪丸、附睪頭和附睪尾組織切片中針對8-OHdG的代表性IF染色。

3.骨組織取材及應用

腎外包被一層薄膜，主要由纖維組織和少量平滑肌組成。一般腎標本取材部位在腎實質(zhì)，實質(zhì)由皮質(zhì)與髓質(zhì)兩部分組成，一般取材部分在腎皮質(zhì)，皮質(zhì)位于腎的外周，其厚度因動物種類不同而有差異，一般在1mm-4mm。腎組織除了采取灌注固定外，直接浸泡固定的效果也是比較滿意。腎組織取材相對比較簡單，一般臨床上采用穿刺術，然后根據(jù)需要切取皮質(zhì)或髓質(zhì)進行觀察。

圖：BSHX減輕腎臟的組織病理學和超微結(jié)構(gòu)病理學。（A）腎臟外觀和大小的初步觀察。（B）腎臟的蘇木精和伊紅（HE）染色（X400）。（C）高碘酸希夫（PAS）腎臟染色（x400）。（D）腎臟透射電子顯微鏡（比例尺，2um）。（E）腎臟透射電子顯微鏡（比例尺，500nm）。